地特三等申論題
105年
[衛生技術] 生物技術學
第 四 題
📖 題組：
請敘述下列生物技術的原理及應用：（每小題 10 分，共 40 分）
請敘述下列生物技術的原理及應用：（每小題 10 分，共 40 分）
📝 此題為申論題，共 4 小題
小題 (四)
酵母菌雙雜交篩選（yeast two-hybrid screening）
思路引導 VIP
看到「酵母菌雙雜交篩選」，考生應直覺反應這是研究「蛋白質-蛋白質交互作用（PPI）」的經典活體（in vivo）技術。解題時必須緊扣「轉錄因子（如 Gal4）的 DNA 結合區（BD）與活化區（AD）可分離與重組」的核心原理，並延伸說明 Bait 與 Prey 的實驗設計，最後列舉其在尋找未知蛋白、驗證已知作用等方面的應用。
小題 (一)
催化性抗體（catalytic antibody）
思路引導 VIP
看到「催化性抗體（abzyme）」，應立刻聯想抗體的「高專一性結合」與酵素的「催化特性」兩者的結合。作答時，原理部分必須點出核心概念——「過渡態理論」與「過渡態類似物（TSA）」的使用；應用部分則舉例其在標靶前驅藥物活化（ADEPT）、解毒（如古柯鹼水解）及新穎化學合成上的潛力。
小題 (二)
免疫共沉澱（Co-immunoprecipitation）
思路引導 VIP
看到「免疫共沉澱（Co-IP）」，直覺應聯想到它是用來研究「蛋白質-蛋白質交互作用」的經典技術。解題時應先點出利用抗體的專一性，接著分步驟敘述原理（細胞裂解、抗體結合、Protein A/G 沉澱、洗脫），最後列舉其在尋找或驗證結合蛋白上的實際應用。
小題 (三)
聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction）
思路引導 VIP
看到「PCR 原理及應用」，首先應點出其為「體外大量擴增特定 DNA 片段」的技術。接著將原理拆解為溫控的三個循環步驟（變性、黏合、延伸），並特別提及 Taq 聚合酶的作用；最後，應用面要涵蓋醫學檢測、法醫鑑定、基礎研究及農業食品等多個面向，以確保拿滿配分。
酵母菌雙雜交系統
💡 利用轉錄因子結構域可拆分性，於活細胞偵測蛋白質間交互作用。
🔗 Y2H 偵測機制流程
- 1 建構質體 — 將目標蛋白與BD融合，候選蛋白與AD融合。
- 2 共同轉型 — 將兩者表現質體植入特定酵母菌株中。
- 3 物理結合 — Bait與Prey在核內交互作用，拉近BD與AD。
- 4 轉錄啟動 — 重建之轉錄因子結合至啟動子，表現報導基因。
- 5 篩選鑑定 — 透過營養缺陷培養基生長或呈色反應確認結果。
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🔄 延伸學習：延伸學習：若報導基因為 HIS3，則陽性反應之酵母菌可在缺組胺酸培養基生長。
