醫療類申論題
106年
[法醫師] 法醫生物學
第 二 題
下列係某一 STR 基因之一段 DNA 序列，請設計一組可以複製出 STR 片段之黏合溫度（annealing temperature）為 58℃之 PCR 引子（5’-3’），並敘述複製該段 STR DNA 所需的反應材料、最佳濃度與反應條件。（25 分）
5’-AAGGGTATGATAGAACACTTGTCATAGTTTAGAACGAACTAACGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGACAGATTGATAGTTTTTTTTTATCTCACTAAATAGTCTATAGTAAACATTTAATTACCAATATTTGGTGCAATTCTGTCAATGA-3’
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📝 此題為申論題
思路引導 VIP
首先需在 STR（AGAT 重複序列）兩側的側翼區尋找適當序列設計引子。利用 Tm ≒ 2°C(A+T) + 4°C(G+C) 公式，尋找 Tm 剛好為 58°C 的序列。正向引子序列與 5' 側翼區相同，反向引子序列則為 3' 側翼區的互補倒轉。接著列出標準的 PCR 試劑及其濃度，並強調法醫 STR 擴增時最終延長步驟（60°C, 30-45分鐘）以促進非模板腺嘌呤（A）附加的重要性。
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【解題關鍵】PCR 引子設計原則（利用 Tm = 2(A+T) + 4(G+C) 公式計算）與法醫 STR 擴增之特殊熱循環條件（需包含最終延長步驟以避免分裂峰）。 【解答】 一、 引子（Primer）設計
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