醫療類申論題
106年
[法醫師] 法醫生物學
第 二 題
下列係某一 STR 基因之一段 DNA 序列，請設計一組可以複製出 STR 片段之黏合溫度（annealing temperature）為 58℃之 PCR 引子（5’-3’），並敘述複製該段 STR DNA 所需的反應材料、最佳濃度與反應條件。（25 分）
5’-AAGGGTATGATAGAACACTTGTCATAGTTTAGAACGAACTAACGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGACAGATTGATAGTTTTTTTTTATCTCACTAAATAGTCTATAGTAAACATTTAATTACCAATATTTGGTGCAATTCTGTCAATGA-3’
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📝 此題為申論題
思路引導 VIP
本題測驗 STR 的 PCR 引子設計與反應條件。第一步：找出核心重複序列 (AGAT)，在前後側翼序列中挑選合適片段設計正反向引子，並利用經驗公式 $T_m = 4(G+C) + 2(A+T)$ 確認達到 58℃。第二步：列出法醫 PCR 反應的標準試劑與最佳濃度。第三步：寫出熱循環條件，並特別點出法醫 STR 鑑定中關鍵的「最終延伸 (60℃, 45 mins)」以促進 +A addition。
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【解題思路】首先分析所給序列，確認 STR 核心重複單位為 AGAT。引子設計需分別取自其前側翼與後側翼序列，並利用引子熔解溫度公式 $T_m = 4(G+C) + 2(A+T)$ 進行推算，使其達目標值 58℃。接著依據法醫 DNA 實驗室標準，詳述 PCR 材料與熱循環條件。
【詳解】
一、PCR 引子（Primer）設計
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