地特三等申論題
107年
[衛生技術] 生物技術學
第 二 題
近來發現微小 RNA（microRNA, miRNA）在基因表現之調控上扮演重要角色，請說明利用 TaqMan 和 SYBR-green 反轉錄-聚合酶連鎖反應（RT-qPCR）檢測 miRNA 的原理。（25 分）
📝 此題為申論題
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本題得分關鍵在於點出 miRNA 長度極短（約 22 nt）的特性，因此解答必須先說明如何透過特殊的反轉錄（RT）技術（如 Stem-loop 引子或 Poly(A) 加尾）來延長 cDNA。接著，再分別針對 qPCR 階段，詳細論述 TaqMan 探針（FRET 原理、外切酶活性）與 SYBR-green 染劑（嵌入雙股 DNA、需熔解曲線）的螢光定量機制。
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【破題】 微小 RNA（miRNA）長度僅約 22 個核苷酸，因片段過短，無法直接使用傳統 PCR 引子進行擴增。因此，利用 RT-qPCR 檢測 miRNA 時，必須先透過特殊的反轉錄（RT）策略延長 cDNA 序列，再搭配 TaqMan 或 SYBR-green 進行螢光定量分析。 【論述】
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