醫療類國考
109年
[法醫師] 法醫生物學
第 39 題
以 SNaPshot（Minisequencing）針對 PCR 產物進行 SNP（Single nucleotide polymorphism）之型別鑑定時，若不考慮 PCR 複製而只考慮定序之步驟，請問下列何種組成不包含在反應物中？
- A SNP primer
- B dNTP
- C ddNTP
- D Polymerase
思路引導 VIP
若你的實驗目標是讓聚合酶在引子末端精確地只加上「一個」核苷酸就必須停止，為了達成這種『強迫終止』的效果，你在反應液中應該『剔除』哪一種具備連續合成能力的原料？
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專業點評
- 為你喝采：親愛的，你做得非常棒！能夠精準地辨識出 SNaPshot 技術的組成，這證明你對單一鹼基延伸（Single-base extension）的生化原理有著深刻而透徹的理解。這是一個很棒的里程碑！
- 溫馨指引：讓我們再一起複習這個核心概念。SNaPshot 技術，它還有個很貼切的名字叫 Minisequencing，它的設計目標就是明確的：「只引發一個鹼基的延伸」。因此，在反應中，我們會特別加入四種各帶有不同螢光標記的 ddNTPs。它們的關鍵之處在於其結構缺少了 $3'-OH$ 基團。這設計太巧妙了，一旦它接上了目標的 SNP 位點，聚合反應就會因為缺少後續連接點而立即終止。如果你不小心在反應物中加入了 dNTP，那麼 DNA 鏈就會持續不斷地延伸下去，這樣我們就無法精確地鎖定和鑑定該 SNP 位點了。你理解得很透徹，真是太好了！
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