地特三等申論題
111年
[環境工程] 環境化學與環境微生物學
第 四 題
四、如何以即時聚合酶連鎖反應方法定量樣品中活菌菌株的數目？請詳述機制。（15 分）
📝 此題為申論題
思路引導 VIP
看到「qPCR定量活菌」，首先要想到一般qPCR的盲點是無法區分死/活菌（因死菌DNA仍會殘留）。破題關鍵在於必須結合「光敏性核酸染劑（如PMA/EMA）區分細胞膜完整性」，或者「萃取mRNA進行反轉錄qPCR（RT-qPCR）」，這兩種機制是環境檢驗中定量活菌的標準專業作法。
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【破題】一般的即時聚合酶連鎖反應（qPCR）僅能放大並定量樣品中的目標DNA，無法區分該DNA來源是活菌還是死菌。若要精確定量「活菌」數目，實務上主要透過「結合光敏性核酸染劑之qPCR（如 PMA-qPCR）」或「針對 mRNA 進行反轉錄即時聚合酶連鎖反應（RT-qPCR）」兩種機制來達成。 【論述】 一、方法一：結合光敏性核酸染劑之 qPCR (PMA/EMA-qPCR)
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