hce_nsysu
111年
普通生物及生化概論
第 78 題
In DNA sequencing by the Sanger (dideoxy) method:
- A radioactive dideoxy ATP is included in each of four reaction mixtures before enzymatic synthesis of complementary strands.
- B specific enzymes are used to cut the newly synthesized DNA into small pieces, which are then separated by electrophoresis.
- C the dideoxynucleotides must be present at high levels to obtain long stretches of DNA sequence.
- D the role of the dideoxy CTP is to occasionally terminate enzymatic synthesis of DNA where Gs occur in the template strands.
- E the template DNA strand is radioactive.
思路引導 VIP
想像你正在組裝一條長鏈，每個組件都必須同時具備「接頭」和「插座」才能持續延伸。如果今天工廠混入了一些「只有接頭、沒有插座」的特殊組件，當這些組件被裝上長鏈時，後續的組裝會發生什麼變化？再進一步思考，如果這些特殊組件的形狀規定只能與模版上的特定標記對接，這對於我們判斷模版上的標記位置有什麼幫助？
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AI 詳解
AI 專屬家教
恭喜你精準地掌握了桑格定序法（Sanger sequencing）的核心邏輯！這題考驗的是對「鏈終止反應」細節的分子機制理解，你能從眾多干擾選項中選出正確敘述，表現非常優異。
鏈終止的關鍵：ddNTP 的結構特徵
桑格定序法的核心在於使用了雙去氧核苷三磷酸（ddNTPs）。與一般的 dNTPs 相比，ddNTPs 在脫氧核糖的 3' 位置缺少了羥基（$-OH$）。在 DNA 合成過程中，下一個核苷酸必須藉由其 5' 端的磷酸基與前一個核苷酸的 3'-$OH$ 形成磷酸二酯鍵；一旦 DNA 聚合酶誤將 ddNTP 嵌入新合成股，反應就會因為缺乏 3'-$OH$ 而被迫中斷。因此，選項 (D) 所述，當模版股出現鳥嘌呤（G）時，互補位置本應放入胞嘧啶（C），若放入的是 ddCTP，合成就會在該處隨機終止。
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