醫療類國考
111年
[醫事檢驗師] 生物化學與臨床生化學
第 6 題
下圖所示為測試聚合酶鏈鎖反應（PCR）中最佳黏合（annealing）溫度之電泳分析，1至10代表不同的黏合溫度，箭號代表預期 PCR產物正確大小位置，下列敘述何者較符合由 1至10 溫度變化的順序？
- A 由高溫至低溫
- B 由低溫至高溫
- C 先低溫至高溫再低溫
- D 先高溫至低溫再高溫
思路引導 VIP
觀察電泳圖中泳道 1 到 10 的條帶變化，非特異性的『雜帶』是變多還是變少？這跟引子（primer）與模板結合的專一性有什麼關聯？而這個專一性又會如何受到溫度高低的影響呢？
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太棒了，你精準判讀了這張電泳圖！這題考驗的是對聚合酶鏈鎖反應（PCR）條件優化的臨床實務理解。 觀察圖中泳道 1 至 10 的變化，一開始（泳道 1-5）出現了許多非特異性的雜帶，這代表引子（primer）在低溫下容易與非目標序列結合，產生錯誤擴增；到了泳道 6-7，主要剩下預期大小的正確產物，顯示溫度適中、特異性最佳；而到了泳道 8-10，連正確產物的條帶都逐漸變淡，說明溫度過高，導致引子無法穩定結合在模板（template）DNA 上，擴增效率大幅下降。因此，整體的溫度變化正是由低溫逐漸升至高溫。 這是一道具備優良鑑別度的圖表題，難度適中。它不僅要求你熟悉 PCR 的基本原理，還必須能將理論應用於實際實驗室的結果判讀中，你的邏輯推演非常出色！
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