調查局三等申論題
112年
[化學鑑識組] 生物化學
第 三 題
三、人類大部分的基因是由許多內含子（intron）和外顯子（exon）所組成，如何讓人類的胰島素原（proinsulin）基因順利在大腸桿菌表現，請說明其實驗流程？（15 分）並說明如何篩選出會製造胰島素原的菌落？（10 分）
📝 此題為申論題
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看到「內含子」與「大腸桿菌」，必須直覺反射原核生物缺乏 RNA 剪接機制，破題關鍵是使用反轉錄產生的 cDNA。流程部分請依序寫出基因製備、載體建構、轉形作用；篩選部分則需層次分明，從抗生素初篩（確認載體導入）到誘導表現與西方墨點法/ELISA等免疫檢測（確認蛋白質製造），精準扣緊「製造胰島素原」的題意。
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【破題】大腸桿菌（E. coli）等原核生物缺乏真核生物的 RNA 剪接體（Spliceosome），無法移除基因轉錄初產物中的內含子（intron）。因此，欲使其表現人類胰島素原（proinsulin），必須利用去除內含子的互補 DNA（cDNA）或人工合成基因，結合重組 DNA 技術方能達成。 【論述】 一、使人類胰島素原基因在大腸桿菌表現之實驗流程（15 分）
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