調查局三等申論題
112年
[醫學鑑識組] 生物化學
第 三 題
人類大部分的基因是由許多內含子（intron）和外顯子（exon）所組成，如何讓人類的胰島素原（proinsulin）基因順利在大腸桿菌表現，請說明其實驗流程？（15 分）並說明如何篩選出會製造胰島素原的菌落？（10 分）
📝 此題為申論題
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考生看到此題應立刻聯想到「真核生物與原核生物基因表現系統的差異」。核心破題點在於：大腸桿菌缺乏剪接體（spliceosome），無法去除內含子，因此必須使用反轉錄技術製備不含內含子的 cDNA。解題架構應分為兩大塊：(1) 從 mRNA 到 cDNA 再到表現載體建構與轉型的「實驗流程」；(2) 從抗生素初步篩選到蛋白質免疫分析（Western blot/ELISA）的「表現確認篩選」。
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【破題】 人類基因體含有內含子（intron），而大腸桿菌（Escherichia coli）身為原核生物，缺乏真核生物的 RNA 剪接機制（RNA splicing）。因此，欲使人類胰島素原（proinsulin）基因於大腸桿菌中表現，首要關鍵為避開內含子，利用成熟的信使 RNA（mRNA）合成互補 DNA（cDNA），並搭配合適的原核表現載體來進行重組 DNA 實驗。 【論述】
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