司法三等申論題
112年
[鑑識人員] 生物化學
第 三 題
人類大部分的基因是由許多內含子（intron）和外顯子（exon）所組成，如何讓人類的胰島素原（proinsulin）基因順利在大腸桿菌表現，請說明其實驗流程？（15 分）並說明如何篩選出會製造胰島素原的菌落？（10 分）
📝 此題為申論題
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看到本題應首先聯想到「原核生物（大腸桿菌）缺乏真核生物的RNA剪接（RNA splicing）機制」，因此無法直接表現含內含子（intron）的基因體DNA。解題關鍵在於利用成熟mRNA反轉錄出互補DNA（cDNA），再透過基因重組技術轉入具備原核啟動子的表現載體，最後藉由抗生素與蛋白質免疫分析進行多層次篩選。
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【破題】原核生物大腸桿菌缺乏真核生物的 RNA 剪接機制，無法移除內含子（intron）。因此，欲使人類胰島素原基因在原核系統中表現，必須先從細胞中取得已去除內含子的成熟訊息 RNA，進而合成互補 DNA（cDNA），再透過重組 DNA 技術導入宿主細胞。 【論述】 一、人類胰島素原基因在大腸桿菌表現之實驗流程（15 分）
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