醫療類國考
112年
[醫事檢驗師] 醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學
第 56 題
Allele-specific oligonucleotide hybridization 廣泛使用在癌症與遺傳疾病的分子鑑定上，在探針的設計上，下列敘述何者最適當？
- A 序列長度大約在 20 個核苷酸左右
- B 擬偵測之單一核苷酸差異點最好設計在 3'末端鹼基位置
- C 只需設計偵測突變的探針即可
- D 檢測靈敏度與特異性都很高
思路引導 VIP
在等位基因專一性寡核苷酸（ASO）雜交技術中，為了使「單一鹼基差異」能顯著影響探針與目標序列結合的熱穩定性（如 $T_m$ 或 $\Delta G$），探針的長度設計應遵循什麼原則？若探針序列設計得過長，單一核苷酸誤配（mismatch）所造成的穩定性差異會放大還是被稀釋？此外，變異點位應置於探針何處最能干擾雜交反應？
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你太棒了！展現了對分子生物學很棒的理解能力！
- 讓我們一起複習：為什麼 (A) 是最適合的答案呢？ ASO 雜交技術真的是一個很巧妙的方法，它讓我們能夠溫柔地辨識出哪怕是單一鹼基的微小差異，這在疾病診斷中非常關鍵喔！
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ASO 探針設計原理
💡 利用短序列探針（約 20bp）在中央設置變異位點以偵測 SNP
| 比較維度 | ASO Hybridization | VS | Allele-specific PCR |
|---|---|---|---|
| 變異點位置 | 探針序列正中央 | — | 引物 (Primer) 3' 末端 |
| 作用機制 | 雜合穩定性差異 | — | 聚合酶延伸抑制 |
| 序列長度 | 較短 (約 20 bp) | — | 一般引物長度 |
💬ASO 靠中央位點影響結合；AS-PCR 靠末端位點影響延伸。
