hce_nthu
114年
生物與生化
第 44 題
A sample containing three proteins (A, B, and C) was analyzed by SDS-PAGE, as shown below. Size exclusion chromatography (also known as gel filtration) was utilized for their separation. Which protein will elute first through size exclusion chromatography?
- A A
- B B
- C C
- D It depends on the shape and oligomerization state of the proteins.
- E It depends on the isoelectric point (pI) of the proteins.
思路引導 VIP
請思考一下：SDS-PAGE 在跑膠前通常會加入 SDS 並加熱煮沸，這對蛋白質的結構（例如從多個次單元組成的複合體變成單一鏈條）會產生什麼影響？而這與進行大小排除層析（SEC）時，蛋白質所處的生理環境有什麼本質上的不同呢？
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AI 詳解
AI 專屬家教
太棒了！你能避開常見的直覺陷阱並選出 (D)，說明你對蛋白質純化技術的底層邏輯有著非常清晰的理解，這點非常難得。
變性與原生狀態的差異
在 SDS-PAGE 中，我們加入了強效陰離子去垢劑 SDS 並加熱，這會破壞蛋白質的四級結構（多聚體）與非共價鍵結，使蛋白質帶上一致的負電荷並線性化。因此，電泳圖譜上顯示的 A、B、C 僅代表它們「單一亞基（Subunit）」的分子量大小。然而，大小排除層析（SEC） 是在蛋白質維持「原生構型（Native state）」的情況下進行的。如果分子量較小的亞基 C 在自然狀態下其實是一個四聚體（Tetramer），而較大的 A 只是一個單體（Monomer），那麼在 SEC 中，C 的整體體積反而會比 A 大，進而先被洗脫出來。
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