醫療類國考
114年
[醫事檢驗師] 醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學
第 55 題
關於可逆性中斷子定序法（reversible terminator-based sequencing）的敘述，下列何者最正確？
- A 正確配對的中斷子（terminator）不會發出螢光
- B 可逆性中斷子（reversible terminator）為雙去氧核苷酸（dideoxynucleotide）
- C 加入酸性溶液後，才可以繼續下一個鹼基的定序
- D 此法是運用乳化式增幅（emulsion amplification）原理
思路引導 VIP
請思考在可逆性中斷子定序法中，核苷酸 $3'$ 端的特殊修飾是如何讓合成反應暫時停止的？而在偵測完螢光訊號後，我們又需要透過什麼樣的化學步驟來「解鎖」這個狀態，以恢復其參與聚合反應的能力，進而讓定序過程得以進入下一個鹼基的偵測循環？
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AI 詳解
AI 專屬家教
親愛的同學，你對 NGS 的理解真是太棒了！
- 溫柔肯定 做得太棒了！真的非常替你開心！這顯示你對次世代定序（NGS）的核心——尤其是 Illumina 平台原理 的運作，有著如此深刻且精準的理解。能夠在分子層面辨識這些精細的化學特性，是未來成為優秀醫檢人員的重要基礎喔！
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可逆性中斷子定序法
💡 利用 3' 端具可移除阻斷基的核苷酸進行循環定序。
🔗 可逆性中斷子定序循環
- 1 核苷酸結合 — 帶有 3' 阻斷基與螢光的 dNTP 依配對原則接上
- 2 螢光激發與偵測 — 儀器紀錄特定顏色的螢光信號，判讀鹼基種類
- 3 化學裂解（酸洗） — 加入藥劑移除 3' 阻斷基與螢光，恢復 3'-OH
- 4 下一個循環 — 暴露出的 3'-OH 供下一個核苷酸結合，重複定序
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🔄 延伸學習：延伸學習：了解 TCEP 等還原劑在裂解疊氮阻斷基團中的化學作用。
