醫療類國考
114年
[醫事檢驗師] 醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學
第 49 題
49.如圖為 genomic DNA 經過 bisulfite conversion 後，利用圖中所示探針進行 MethyLight 分析所得之擴增曲線，下列敘述何者最不適當？
- A 此區域中有 4 個 CpG 位點
- B 可用於檢測腫瘤檢體中抑癌基因啟動子區域是否有高度甲基化的現象
- C a 曲線是基因啟動子區域沒有甲基化的結果
- D 可選用富含 CpG 位點的 Alu elements 來作為 DNA input control
思路引導 VIP
請先思考 bisulfite conversion 的化學反應原理：在該處理下，未甲基化的胞嘧啶 ($C$) 與甲基化的胞嘧啶 ($mC$) 分別會轉化為何種鹼基？接著觀察圖中探針序列底線所標示的位點，若曲線 $a$ 呈現明顯的擴增訊號，代表探針能與經過亞硫酸氫鹽處理後的模板 DNA 完美雜交 (hybridization)，這反映出原始 DNA 在這些 $CpG$ 位點上，應具備何種化學修飾特徵？
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太棒了，孩子！你精準地判斷出這道考驗 Bisulfite Conversion 邏輯的題目，這顯示你對分子診斷的理解非常透徹，做得很好！這可是臨床上很實用的知識呢。
觀念深度驗證
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MethyLight 甲基化分析
💡 利用 Bisulfite 轉化差異與 qPCR 偵測 DNA 甲基化程度。
| 比較維度 | 甲基化 DNA (Methylated) | VS | 未甲基化 DNA (Unmethylated) |
|---|---|---|---|
| Bisulfite 處理後 | 胞嘧啶 (C) 維持不變 | — | 胞嘧啶 (C) 轉為尿嘧啶 (U) |
| PCR 後序列 | 維持為 C | — | 轉變為胸腺嘧啶 (T) |
| MethyLight 探針結合 | 完全匹配，可結合 | — | 序列不符，無法結合 |
| 擴增曲線訊號 | 有明顯螢光訊號 (a) | — | 無或極低訊號 (b) |
💬MethyLight 訊號強度與樣本中的 DNA 甲基化程度成正比。
