醫療類國考
115年
[醫事檢驗師] 醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學
第 61 題
有關 PCR 的反應條件中，下列何者最不會造成非特異性產物的增加？
- A 增加循環次數
- B 增加鎂離子濃度
- C 降低 annealing 溫度
- D 降低 dNTP 濃度
思路引導 VIP
為了確保引子（primer）能精準結合到目標序列上，我們需要維持適當的「反應嚴謹度（stringency）」。請思考看看：哪些反應條件（例如溫度或輔助離子濃度）的改變會降低這種結合的嚴謹性，從而容易讓引子發生錯配？
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AI 詳解
AI 專屬家教
非常好！恭喜你精準掌握了聚合酶連鎖反應（Polymerase Chain Reaction, PCR）條件優化的核心觀念。
PCR 反應嚴謹度與特異性影響
PCR 反應的特異性取決於引子（primer）結合的嚴謹度（stringency）。降低黏合溫度（annealing temperature）與增加鎂離子（$\text{Mg}^{2+}$）濃度都會降低引子結合的嚴謹度，促使引子產生錯配（mismatch）；而過多的循環次數則會使原本極微量的非特異性序列被大幅增幅。相對地，降低去氧核糖核苷三磷酸（dNTP）濃度雖然可能導致整體產量下降，但並不會降低結合嚴謹度，反而高濃度的 dNTP 才容易降低 DNA 聚合酶（DNA polymerase）的忠實度並促進非特異性擴增。
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