地特三等申論題
106年
[衛生技術] 生物技術學
第 四 題
📖 題組：
一、請敘述下列分析技術的原理及舉例說明其可能的應用：
一、請敘述下列分析技術的原理及舉例說明其可能的應用：
📝 此題為申論題，共 5 小題
小題 (四)
限制性片段長度多態性（Restriction fragment length polymorphism；RFLP）（5 分）
思路引導 VIP
看到 RFLP，應立刻聯想到「限制酶切割」與「個體DNA序列差異」兩個核心。解題時先說明序列突變如何改變限制酶的切割位點，再簡述電泳與南方墨點法（或PCR）的偵測流程，最後舉出經典應用如親子鑑定或鐮刀型貧血篩檢即可拿滿 5 分。
小題 (一)
毛細管電泳（Capillary Electrophoresis；CE）（10 分）
思路引導 VIP
看到「毛細管電泳」，首先要聯想到它是傳統電泳的微型化與高效化，答題核心必須點出「電泳遷移率」與「電滲透流(EOF)」兩大物理機制。接著在應用面，應舉出生物技術領域中最具代表性的例子，如自動化DNA定序或蛋白質純度分析，以緊扣生技學科背景。
小題 (二)
基質輔助雷射脫附游離飛行時間（Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight；簡稱MALDI-TOF）質譜儀技術（10分）
思路引導 VIP
看到「MALDI-TOF」，應立即拆解為兩部分作答：「MALDI」代表溫和游離大分子的技術（基質吸收雷射能量），「TOF」代表依據質荷比（m/z）決定飛行時間的分離方法。接著結合其「不會打碎大分子」的特性，聯想到蛋白質體學分析與臨床微生物鑑定等經典應用。
小題 (三)
脈衝場凝膠電泳（Pulsed Field Gel Electrophoresis；PFGE）（10 分）
思路引導 VIP
看到PFGE，首先要想到傳統電泳無法分離巨大DNA分子（>50 kb）的限制。接著點出其核心原理：利用不斷改變方向的交替電場，使巨大DNA分子在凝膠中依大小改變方向所需的時間差來達到分離。最後，務必結合臨床或流行病學（如細菌分型、追蹤傳染源）來舉例說明其應用價值。
小題 (五)
巢式 PCR（Nested PCR）（5 分）
思路引導 VIP
看到「巢式 PCR」，應直覺聯想到「兩組引子、兩回合擴增」的核心概念。作答時先闡述透過外側與內側引子進行雙重把關以提升特異性與靈敏度的原理，再舉出微量病原體檢測等臨床或研究應用即可。
RFLP技術原理與應用
💡 利用限制酶切割DNA，藉由序列變異產生的片段長度差異進行分析
🔗 RFLP 技術分析流程
- 1 DNA 萃取 — 從檢體中提取出高品質的基因組 DNA
- 2 限制酶切割 — 特定限制酶於辨識位點切割，因個體變異產生長短不一片段
- 3 電泳與轉漬 — 膠體電泳分離片段，並經南方墨點法轉移至濾膜
- 4 探針雜交顯影 — 標記探針與目標片段結合，顯影觀察條帶數量與位置差異
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🔄 延伸學習：延伸學習：現代多採用 PCR-RFLP，先放大目標區段再切割，節省樣本量與時間。
