醫療類申論題
106年
[法醫師] 法醫生物學
第 二 題
二、下列係某一 STR 基因之一段 DNA 序列，請設計一組可以複製出 STR 片段之黏合溫度（annealing temperature）為 58℃之 PCR 引子（5’-3’），並敘述複製該段 STR DNA 所需的反應材料、最佳濃度與反應條件。（25 分）
5’-AAGGGTATGATAGAACACTTGTCATAGTTTAGAACGAACTAACGATAGAT
AGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGA
CAGATTGATAGTTTTTTTTTATCTCACTAAATAGTCTATAGTAAACATTTAAT
TACCAATATTTGGTGCAATTCTGTCAATGA-3’
5’-AAGGGTATGATAGAACACTTGTCATAGTTTAGAACGAACTAACGATAGAT
AGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGA
CAGATTGATAGTTTTTTTTTATCTCACTAAATAGTCTATAGTAAACATTTAAT
TACCAATATTTGGTGCAATTCTGTCAATGA-3’
📝 此題為申論題
思路引導 VIP
本題考查 PCR 引子設計原則與反應條件設定。需先辨識 STR 序列（AGAT）及其兩側之側翼序列。正向引子直接取 5' 側翼區序列，反向引子則取 3' 側翼區的「反向互補」序列，並以 Tm = 4(G+C)+2(A+T) 等經驗公式估算 Tm 值，使黏合溫度適應於 58℃。接著列出標準 PCR 的反應材料、最佳濃度，以及包含最終延長時間之 PCR 循環條件。
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【解題關鍵】 PCR 引子設計需針對 STR 兩側的側翼序列（Flanking regions），正向引子與 5' 端序列相同，反向引子為 3' 端序列的反向互補；並列出 STR PCR 專用的標準試劑與含最終延長步驟（Adenylation）的熱循環條件。 【解答】
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