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調查局三等申論題 112年 [化學鑑識組] 生物化學

第 一 題

📖 題組:
四、請試述下列名詞之意涵:(每小題 5 分,共 25 分) (一) Isoelectric focusing(IEF)electrophoresis (二) Holoenzyme (三) Calvin cycle (四) Cori cycle (五) Sandwich ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)
📝 此題為申論題,共 5 小題

小題 (一)

Isoelectric focusing(IEF)electrophoresis

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看到等電焦集電泳(IEF),應直指其核心原理:利用蛋白質的等電點(pI)差異進行分離。作答時需點出「pH 梯度膠體」、「淨電荷為零(net charge = 0)」的機制,並補充其作為雙向電泳(2D-PAGE)第一維度的重要應用以增加專業度。

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「等電焦集電泳(Isoelectric focusing electrophoresis, IEF)」是一種利用蛋白質之等電點(isoelectric point, pI)差異進行高解析度分離的電泳技術。 其特徵與機制包含: (1) pH 梯度環境:凝膠中預先藉由兩性電解質(carrier ampholytes)建立穩定的 pH 梯度。

小題 (二)

Holoenzyme

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看到「Holoenzyme」,首要寫出其核心定義與組成公式(Apoenzyme + Cofactor = Holoenzyme)。接著應詳細拆解蛋白質與非蛋白質組分,並舉出生化代謝或分子生物學中的經典實例(如 RNA 聚合酶或需金屬離子的酵素),以展現專業度。

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「全酶(Holoenzyme)」是指具有完整生化催化活性的酵素複合體。特徵包含:(1) 組成結構:由蛋白質部分的「脫輔基酶(Apoenzyme)」與非蛋白質部分的「輔助因子(Cofactor)」結合而成。即:Apoenzyme(無活性)+ Cofactor = Holoenzyme(具活性)。(2) 輔助因子種類:可為無機金屬離子(Metal ions,如 Mg²⁺、Zn²⁺),或是參與反應的有機小分子(稱為輔酶,Coenzyme,如 NAD⁺、FAD 等)。(3) 催化必要性:脫輔基酶單獨存在時缺乏催化能力,必須與特定輔助因子結合,藉此穩定構形或提供參與氧化還原的催化基團,方能啟動酵素動力學反應。 生化實例為:大腸桿菌的 RNA 聚合酶(RNA polymerase)全酶,由核心酵素(Core enzyme,為 Apoenzyme 性質)與 σ 因子(Sigma factor)結合組成,方可正確辨識啟動子並執行轉錄;另一例為碳酸酐酶(Carbonic anhydrase)必須結合鋅離子(Zn²⁺)方能成為具活性的全酶。

小題 (三)

Calvin cycle

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看到「Calvin cycle」,應立即聯想到光合作用的碳固定反應(暗反應)。作答時需點出發生位置(葉綠體基質)、能量來源(ATP與NADPH)、三大核心步驟(固定、還原、再生),並特別強調關鍵酵素 Rubisco 及其受光照驅動的調控機制以展現專業度。

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「卡爾文循環(Calvin cycle)」是指光合作用中的「碳固定反應(Carbon fixation reactions)」或稱暗反應(Dark reactions),主要發生於植物的葉綠體基質(stroma)中。其核心功能為利用光反應所產生的 ATP 與 NADPH,將無機的二氧化碳(CO₂)還原同化成有機醣類(如甘油醛-3-磷酸, G3P)。 其反應過程主要包含三大階段: (1) 碳固定(Carbon fixation):一分子 CO₂ 與五碳糖核酮糖-1,5-雙磷酸(Ribulose-1,5-bisphosphate, RuBP)結合,此步驟由關鍵酵素核酮糖-1,5-雙磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco)催化,生成兩分子 3-磷酸甘油酸(3-phosphoglycerate, 3-PGA)。

小題 (四)

Cori cycle

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看到 Cori cycle,應立即聯想到「肌肉與肝臟之間的代謝分工」。作答時務必點出「骨骼肌的無氧糖解產生乳酸」與「肝臟的糖質新生再造葡萄糖」兩大核心步驟,並說明其避免乳酸堆積及維持能量供應的生理意義。

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「Cori cycle(科里循環)」是指哺乳動物體內骨骼肌(skeletal muscle)與肝臟(liver)之間進行的乳酸與葡萄糖循環代謝途徑。其特徵與機制包含: (1) 肌肉端代謝:在劇烈運動等缺氧狀態下,骨骼肌會進行無氧糖解(anaerobic glycolysis)產生 ATP,並藉由乳酸去氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)將丙酮酸(pyruvate)還原為乳酸(lactate)。 (2) 血液運輸與肝臟端代謝:乳酸經由血液循環運送至肝臟,肝臟細胞將其氧化回丙酮酸後,透過糖質新生(gluconeogenesis)途徑消耗能量合成葡萄糖(glucose),再釋出至血液供肌肉重新利用。

小題 (五)

Sandwich ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)

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看到三明治 ELISA,首先點出其核心原理是利用『兩種抗體(捕捉與偵測)夾擊一個抗原』的免疫分析法。作答時務必列出標準步驟(固定抗體、加入抗原、加入偵測抗體、呈色),並強調其在專一性與靈敏度上的優勢及臨床應用。

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「三明治酵素結合免疫吸附分析法(Sandwich ELISA)」是一種利用抗原與抗體之高度專一性結合,並結合酵素催化反應來進行定量分析的免疫學技術。主要用於檢測樣本中微量抗原(Antigen)的濃度。 其核心特徵與操作步驟包含: (1) 捕捉:將對目標抗原具專一性的捕捉抗體(Capture antibody)固定於微滴定盤(Microtiter plate)底部。

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