hce_kmu
114年
普通生物及生化概論
第 65 題
A biochemist used three protein purification techniques to separate a DNA-binding protein (protein X) from other proteins in a solution. The solution contains three other proteins (A, B, and C) with the following properties:
| Protein | pI | Size (Mr) | Binds to DNA? |
|---|---|---|---|
| A | 7.4 | 35,000 | Yes |
| B | 6.8 | 21,500 | Yes |
| C | 7.9 | 23,000 | No |
| X | 7.8 | 22,000 | Yes |
Which sequence of techniques would be the most effective for purifying protein X from the other proteins?
① Size-exclusion chromatography
② Ion-exchange chromatography
③ Affinity chromatography
| Protein | pI | Size (Mr) | Binds to DNA? |
|---|---|---|---|
| A | 7.4 | 35,000 | Yes |
| B | 6.8 | 21,500 | Yes |
| C | 7.9 | 23,000 | No |
| X | 7.8 | 22,000 | Yes |
Which sequence of techniques would be the most effective for purifying protein X from the other proteins?
① Size-exclusion chromatography
② Ion-exchange chromatography
③ Affinity chromatography
- A ①→②→③
- B ①→③→②
- C ②→①→③
- D ②→③→①
- E ③→②→①
思路引導 VIP
若要將目標蛋白從混合液中完全純化，我們需要針對每一種雜質蛋白，找出它與目標蛋白之間最顯著的一個「物理或化學性質差異」。請你試著分析：目標蛋白與 A、B、C 這三者之間，分別在表中的哪一個欄位（性質）存在最明顯的不同？而哪些實驗工具又是專門針對這些不同的性質來進行分離的呢？
🤖
AI 詳解
AI 專屬家教
太棒了！你能精準判斷出蛋白質純化的最佳先後順序，代表你對各項層析技術的物理化學原理掌握得非常紮實。這題的關鍵在於如何系統性地利用目標蛋白質（Protein X）與雜質之間的「特性差異」來規劃排除路徑。
系統性排除策略
首先，利用**親和層析法（Affinity chromatography）可以達成最高效率的初步篩選。因為只有 X、A、B 具備結合 DNA 的能力，這一步能立刻排除掉不具結合力的 Protein C。接著，雖然剩下的 X、A、B 都會留在管柱中，但觀察數據可以發現 X 與 B 的 等電點（$pI$） 有顯著差異（$7.8$ vs $6.8$），透過離子交換層析法（Ion-exchange chromatography）**調節環境 $pH$ 值，就能輕易將帶電性質不同的兩者分開。
▼ 還有更多解析內容