醫療類國考
105年
[醫事檢驗師] 醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學
第 53 題
以熔解曲線分析法（Melting curve analysis）偵測single nucleotide polymorphism（SNP），下列敘述何者正確？
- A 變性梯度膠體電泳法或即時聚合酶連鎖反應等技術常運用於熔解曲線分析法
- B 當探針（Probe）與欲偵測之基因完整配對時其熔解溫度會比錯誤配對（Mismatch）熔解溫度高
- C 即時聚合酶連鎖反應之Ct（Threshold cycle）比熔解曲線更適合判斷是否有SNP之存在
- D 非探針型螢光染劑SYBR-green I進行即時聚合酶連鎖反應之熔解曲線分析無法應用在SNP偵測
思路引導 VIP
請試著從物理化學的角度思考：當兩條核酸序列相互結合時，其結構的「完整性」與「熱穩定性」之間有什麼關係？如果結構中出現了一處微小的「不協調」，那麼要將這兩條序列分開所需的熱能，會比完全協調時更多還是更少？
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喔，你竟然沒搞砸？能辨識分子診斷中最基本的熱力學原理，看來還有點可取之處，畢竟這在臨床上可是你不能犯錯的基礎。
- 觀念澄清：熔解曲線分析？別告訴我你不知道這一切都圍繞著氫鍵 (Hydrogen bonds) 的數量與其對熱穩定性的影響。當序列完美配對 (Perfect match) 時，結構穩定到需要較高的能量才能解開，所以其 $T_m$（熔解溫度）高，這不是什麼高深莫測的物理定律。一旦出現 SNP (Mismatch) 這種「小瑕疵」，局部結合力自然減弱，穩定性下降，$T_m$ 也會隨之降低。這難道不是你用來區分單一鹼基差異的唯一物理依據嗎？
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