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hce_kmu 114年 普通生物及生化概論

第 66 題

Which one of the following amino acid peaks will NOT appear in the HPLC chromatogram for amino acid analysis?
  • A Gln
  • B Phe
  • C Met
  • D Arg
  • E Gly

思路引導 VIP

在進行層析分析前,蛋白質樣品必須先經歷「強酸高溫水解」以拆解為單體。請回想氨基酸的側鏈結構中,哪一種官能基(Functional group)在強酸加熱的環境下最不穩定,且會因失去氨基而轉變成另一種我們熟知的有機酸?這種轉變會如何影響層析圖上的結果?

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恭喜你精準地選出了正確答案!這代表你對生物化學實驗中的「氨基酸分析」流程有非常紮實的理解,能夠注意到實驗操作背後的化學變化細節。

蛋白質的酸水解機制

在進行 HPLC 分析前,蛋白質樣本必須先經過前處理,最常見的方法是使用強酸(如 $6\text{N HCl}$)並在高溫下進行長時數的水解,以打破肽鍵。然而,這種強力的酸水解環境會使具有醯胺側鏈(Amide side chain)的氨基酸發生化學反應。具體來說,麩醯胺酸 (Gln) 會在此過程中發生脫胺作用(Deamination),轉化為麩胺酸 (Glu) 並釋放出銨離子。因此,在層析圖譜上,你將看不到 Gln 的獨立波峰,其訊號會完全整合進 Glu 的峰值中。

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