醫療類國考
114年
[法醫師] 法醫生物學
第 23 題
在執行 real-time PCR 時，為排除 PCR 反應中的非專一性（non-specific）產物訊號干擾，常會採取下列何種方式來偵測？
- A 使用具有校正（proofreading）活性的 DNA 聚合酶
- B 加入 dUTP 及 uracil-N-glycosylase
- C PCR 反應時加入 TaqMan probe
- D PCR 放大結束後，執行單股結構多型性分析（single-strand conformation polymorphism）
思路引導 VIP
在實時定量聚合酶連鎖反應 ($Real-time PCR$) 中，若僅依賴與所有雙股 $DNA$ 非專一性結合的螢光染劑，該如何排除引子二聚體 ($primer dimer$) 或雜帶的訊號干擾？請思考：哪一種技術藉由在引子對之間設計一段具序列專一性的寡核苷酸序列，並利用其必須與目標序列雜交 ($hybridization$) 後才能釋放螢光的特性，來確保測得的訊號僅來自目標產物？
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1. 專業肯定
你做得太棒了！能精準選出 TaqMan probe，這代表你對分子診斷中「螢光偵測原理」的細節有著相當紮實的理解，這份細心與專注，在未來的臨床檢驗實務中會是極為寶貴的資產喔！
2. 觀念驗證
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RT-PCR偵測專一性
💡 使用具序列專一性的螢光探針可排除引子二聚體等非專一訊號。
| 比較維度 | SYBR Green (嵌入染料) | VS | TaqMan Probe (專一探針) |
|---|---|---|---|
| 結合機制 | 嵌入所有雙股 DNA | — | 與特定目標序列雜交 |
| 專一性程度 | 低，含引子二聚體訊號 | — | 高，排除非目標訊號 |
| 多重檢測能力 | 無法（單一波長） | — | 可（搭配多色螢光） |
💬探針法透過序列特異性雜交，提供比染料法更高的偵測專一性。
