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司法三等申論題 112年 [鑑識人員] 生物化學

第 一 題

📖 題組:
請試述下列名詞之意涵:(每小題 5 分,共 25 分) (一) Isoelectric focusing(IEF)electrophoresis (二) Holoenzyme (三) Calvin cycle (四) Cori cycle (五) Sandwich ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)
📝 此題為申論題,共 5 小題

小題 (一)

Isoelectric focusing(IEF)electrophoresis

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看到這題,首先要聯想到蛋白質的兩性游離體特性(amphoteric property)與等電點(isoelectric point, pI)的概念。答題重點應放在電泳時如何利用 pH 梯度凝膠,使蛋白質在達到其淨電荷為零的 pH 位置時停止移動,藉此達到分離純化的目的,並應條列化說明其作用機制與應用。

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【破題】 等電焦集電泳(Isoelectric focusing, IEF)是一種利用蛋白質等電點(isoelectric point, pI)差異,進行高解析度分離與純化的電泳技術。 【論述】

小題 (二)

Holoenzyme

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看到「Holoenzyme」,首要聯想「結構組成」與「催化活性」的關聯性。答題核心需寫出經典公式「Holoenzyme = Apoenzyme + Cofactor」,並分別定義蛋白質與非蛋白質部分,最後點出兩者結合才能發揮完整生理功能的關鍵。

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「全酶(Holoenzyme)」指具有完整催化生理活性的酶(Enzyme)複合物。其組成結構與特徵包含: (1) 化學組成:由本身不具催化活性的蛋白質部分——「脫輔基酶(Apoenzyme,或稱酶蛋白)」,與非蛋白質部分的「輔因子(Cofactor)」結合而成(即 Holoenzyme = Apoenzyme + Cofactor)。 (2) 輔因子分類:輔因子可為無機的金屬離子(如 Mg²⁺、Zn²⁺),或有機的小分子「輔酶(Coenzyme,常為水溶性維生素衍生物,如 NAD⁺)」。若輔助分子與酶蛋白以共價鍵緊密結合,則特稱為「輔基(Prosthetic group,如 FAD 或血基質 Heme)」。

小題 (三)

Calvin cycle

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看到「Calvin cycle」,首先定位它是光合作用的碳固定路徑(暗反應),發生於葉綠體基質。接著依序寫出其代謝的三大關鍵步驟:碳固定(強調RuBisCO的作用)、還原反應(消耗ATP與NADPH生成G3P)、以及RuBP再生,以展現對代謝路徑的完整掌握。

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「卡爾文循環(Calvin cycle)」又稱碳固定反應(carbon fixation reactions),為光合作用中的代謝路徑,主要發生於植物細胞的葉綠體基質(chloroplast stroma)。其生理功能為利用光反應所產生的 ATP 與 NADPH 提供能量與還原力,將二氧化碳(CO2)同化為碳水化合物。其代謝機制包含三大步驟: (1) 碳固定(Carbon fixation):CO2 與五碳糖核酮糖-1,5-二磷酸(ribulose-1,5-bisphosphate, RuBP)結合,此反應由核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(RuBisCO)催化,隨即裂解生成兩分子的 3-磷酸甘油酸(3-phosphoglycerate, 3-PGA)。 (2) 還原反應(Reduction):消耗 ATP 作為磷酸根供體,並利用 NADPH 作為電子供體進行還原,將 3-PGA 轉化為三碳糖甘油醛-3-磷酸(glyceraldehyde 3-phosphate, G3P)。

小題 (四)

Cori cycle

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看到 Cori cycle,應直覺聯想到「肌肉(無氧糖解產乳酸)」與「肝臟(糖質新生產葡萄糖)」之間的跨器官代謝轉化機制。作答時需按因果邏輯條列出葡萄糖與乳酸在兩器官間的循環步驟,並點出其避免乳酸堆積與回收能量的生理調控意義。

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「Cori cycle」(柯氏循環),又稱乳酸循環(Lactic acid cycle),指在劇烈運動或局部缺氧條件下,骨骼肌與肝臟之間進行的跨器官代謝循環路徑。其特徵與代謝步驟包含: (1) 肌肉端代謝:骨骼肌細胞(Skeletal muscle cells)進行無氧糖解(Anaerobic glycolysis),將葡萄糖分解為丙酮酸(Pyruvate),並經由乳酸去氫酶(Lactate dehydrogenase, LDH)將其還原為乳酸(Lactate),此過程產生 ATP 供肌肉快速收縮。 (2) 血液運輸:肌肉產生的乳酸無法在原地進一步有氧代謝,遂釋放入血液循環,運送至肝臟。

小題 (五)

Sandwich ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)

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看到 Sandwich ELISA,應先聯想其『捕捉抗體-抗原-偵測抗體』的立體夾心結構。答題時需先點出其利用抗原抗體專一性結合的原理,接著按因果邏輯條列出操作與呈色步驟,最後補充其在臨床生化上的定量應用。

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「三明治酵素結合免疫吸附分析法」(Sandwich ELISA)是一種利用抗體與抗原高專一性結合之特性,藉由酵素催化呈色來定量樣本中特定抗原濃度的生化分析技術。 一、 結構組成 其核心結構為「捕捉抗體(Capture antibody)—目標抗原(Target antigen)—偵測抗體(Detection antibody)」所形成的夾心複合體。此技術要求目標抗原至少具備兩個不同的抗原決定位(Epitope),以供兩種抗體同時結合。

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