調查局三等申論題
109年
[醫學鑑識組] 分子生物學
第 一 題
📖 題組：
關於分子生物技術，請說明：（每小題10分，共20分） (一)Real-time RT-PCR（Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction）之原理。 (二)請說明 Massively parallel sequencing（即 Next generation sequencing）之原理及其目前於醫學鑑識上的應用。
關於分子生物技術，請說明：（每小題10分，共20分） (一)Real-time RT-PCR（Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction）之原理。 (二)請說明 Massively parallel sequencing（即 Next generation sequencing）之原理及其目前於醫學鑑識上的應用。
📝 此題為申論題，共 2 小題
小題 (一)
Real-time RT-PCR（Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction）之原理。
思路引導 VIP
看到此題，考生應立即將名詞拆解為「RT (Reverse Transcription)」與「Real-time PCR」兩部分來構思。作答時須按時序說明：首先敘明如何利用反轉錄酶將 RNA 轉為 cDNA，接著詳細剖析即時定量的螢光化學原理（包含 SYBR Green 與 TaqMan Probe 兩種經典機制），最後務必點出 Ct 值（Cycle threshold）與起始模板濃度的反比關係。
小題 (二)
請說明 Massively parallel sequencing（即 Next generation sequencing）之原理及其目前於醫學鑑識上的應用。
思路引導 VIP
看到次世代定序（NGS），應立即聯想其核心機制「大量平行（Massively parallel）」與「邊合成邊定序（Sequencing by synthesis）」。答題時需將原理依序拆解為「建庫、擴增、定序、比對」四步驟，並結合法醫學實務，點出其在降解樣本、混合跡證及外觀祖源推斷上的突破性應用。
Real-time RT-PCR 原理
💡 結合反轉錄與螢光偵測技術，達成標的 RNA 之即時定量分析。
| 比較維度 | SYBR Green I | VS | TaqMan Probe |
|---|---|---|---|
| 專一性 | 較低（會結合所有雙股） | — | 極高（具備專一性探針） |
| 偵測原理 | 小溝嵌合螢光 | — | 5'→3' 外切酶水解 |
| 成本與難度 | 便宜、不需設計探針 | — | 昂貴、需精準設計探針 |
| 後續處理 | 須進行熔解曲線分析 | — | 可多重 PCR 同時偵測 |
💬SYBR Green 適合一般研究篩選，TaqMan 則為臨床與鑑識之金標準。
