第 一 題
二、銀杏葉提取物之總黃酮醇苷不得少於 24.0%，其含量測定係將檢品 35 mg加甲醇-25%鹽酸溶液（4：1）的混合溶液 25 mL，置水浴中加熱迴流 30分鐘，迅速冷卻至室溫，轉移至 50 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得檢品溶液。以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）為流動相；檢測波長為 360 nm。理論板數按槲皮素峰計算應不低於 2500。以槲皮素對照品的峰面積為對照，分別按下表相對應的校正因子計算槲皮素、山柰素和異鼠李素的含量，用待測成分色譜峰與槲皮素色譜峰的相對滯留時間確定槲皮素、山柰素和異鼠李素的峰位，其相對滯留時間應在規定值的 5%範圍內（若相對滯留時間偏離超過 5%，則應以相應的被替代對照品確證為準）。相對滯留時間及校正因子（F）見下表： | 待測成分（峰） | 相對滯留時間 | 校正因子（F） | | --- | --- | --- | | 槲皮素（quercetin） | 1.00 | 1.0000 | | 山柰素（kaempferol） | 1.77 | 1.0020 | | 異鼠李素（isorhamnetin） | 2.00 | 1.0890 | 總黃酮醇苷含量=（槲皮素含量+山柰素含量+異鼠李素含量）× 2.51 試說明：（每小題 6 分，共 30 分）
小題 (一)
思路引導 VIP
從「總黃酮醇苷」和「槲皮素等3種成分(苷元)」的關係切入。苷類（Glycosides）在植物中常連接多種不同的糖基，直接定量極為困難。加入鹽酸（強酸）並加熱迴流，是為了進行「酸水解反應」，將所有黃酮醇苷切斷糖基，水解成對應的游離苷元（Aglycone）。而甲醇作為溶媒可增加此類脂溶性成分的溶解度，確保反應完全並溶出標的物。
小題 (二)
思路引導 VIP
本題測驗「一測多評法 (QAMS)」或「相對校正因子 (Relative Correction Factor)」的概念。思考重點：這三種成分化學結構極為相似（皆為黃酮醇苷元），在指定的檢測波長(360 nm)下具有相似或成比例的莫耳吸光係數(molar absorptivity)。因此，只要透過實驗確認其響應值(response)的固定比例（即表格中的校正因子F），就可以用單一標準品（槲皮素）推算出另外兩者的含量，節省標準品的成本。
小題 (三)
思路引導 VIP
前處理將「苷」變成了「苷元」，層析定量出來的是「苷元」的重量。但題目要求的規格是「總黃酮醇苷(glycosides)」的含量。因此，2.51 是一個「分子量轉換係數」。思考方向：銀杏葉黃酮醇苷類平均連接的糖基分子量，大約是其苷元分子量的1.51倍，故苷(1+1.51) : 苷元(1) 的比值大約為 2.51。這是一個基於銀杏葉成分平均分子量推導出的經驗常數。
小題 (四)
思路引導 VIP
從管柱材質判斷層析類型，再藉由相對滯留時間推斷極性。層析條件：十八烷基矽烷鍵合矽膠 (ODS, C18 column)，這屬於「逆相層析 (Reversed-Phase Chromatography, RPC)」。逆相層析的固定相為非極性，流動相為極性（水/甲醇）。因此，極性大的化合物與流動相親和力高，會先沖提(滯留時間短)；極性小的化合物與固定相親和力高，後沖提(滯留時間長)。 比較相對滯留時間 (RRT)：槲皮素(1.00) < 山柰素(1.77) < 異鼠李素(2.00)。
小題 (五)
思路引導 VIP
本題考查分析方法確效 (Analytical Method Validation) 的基本指引，如 ICH Q2。需要針對該「定量方法」列舉必須進行的確效項目，並簡單說明如何執行。關鍵字：特異性、線性、準確度、精密度、偵測/定量極限、耐變性。作答時要結合題目的情境（如 HPLC, 前處理有水解等）來論述會更完整。